Técnica de secuenciación de mutación en el Accidente Cerebrovascular

Tema: Mutación heterocigótica como causa de la Arteriopatía cerebral autosómica recesiva con infarto subcortical y leucoencefalopatía (CARASIL)
Objetivo:  Reportar la mutación heterocigótica en el gen HTRA1 presente en la Arteriopatía cerebral autosómica recesiva con infarto subcortical y  leucoencefalopatía
Muestra: Sangre y leucocitos periféricos 

(Ácido nucléico): ADN genómico

G (Gen a secuenciar): NOTCH y HTRA1 (mutaciones heterocigóticas missense) 

Técnica: Secuenciación Sanger
 V: Datos clínicos y radiológicos
     Softwares que incluyen la conservación de la mutación del domino  de serina proteasa de tipo  tripsina

Obtenido de: https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/30068478/

Aplicación de técnicas de biología molecular en la Enfermedad Cerebrovacular

Tema: Asociación clínica entre el polimorfismo de nucleótido único (SNPs) ADAMTS7 con vulnerabilidad de la placa ateroesclerótica en el Accidente Cerebrovascular.
Objetivo:  Evaluar la asociación entre dos variantes (SNPs) de ADAMTS7 y el accidente cerebrovascular o la vulnerabilidad de la placa ateroesclerótica. 
Muestra:  2 mL de sangre periférica 
AN (Ácido nucléico): ADN genómico
G (Gen a amplificar): Polimorfismos ADAMTS7 

PCR: PCR en tiempo real (real time PCR system)     
          Desnaturalización: 95ºC x 10 minutos
          Hibridación: 40 ciclos de 95ºC x 15 segundos
          Elongación: 60ºC x 1 minuto
V: Secuenciación 

Tabla obtenida mediante la secuenciación de los polimorfismos de nucleótido unico.

 Obtenido de: https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/31651847/

Alteraciones en los mecanismos epigenómicos en la enfermedad cerebrovascular

El papel del miRNA-320 y miRNA 124 en la enfermedad cerebrovascular. 

En la enfermedad cerebrovascular, los microRNA´s promueven efectos necróticos y la apoptosis de las células vasculares corticales. En concreto, en la obtención de sangre periférica de pacientes isquémicos de 18 a 29 años, se obtuvo que el microRNA-320 conducía a la angiogénesis cortical, ligado a regulaciones descendentes a través del factor de crecimiento transformante beta , señalización intercelular, señalización de la proteína kinasa activada, señalización WNT y mecanismos de adhesión focal. Como marcador clínico, el miRNA 124 destaca a nivel post-isquémico al indicar que el daño cerebral podría inducir la regeneración neuronal, neuroplasticidad, estrés oxidativo, etc. 

Papel del miRNA 124  a nivel post-isquémico. 

Obtenido de: https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/29683506/

Activación del hnRNPK en la regulación de la traducción del TAK 1 en el Accidente Cerebrovascular

El papel de las hnRNP en la traducción del RNA de la microglia del SNC y su papel inflamatorio en el accidente cerebrovascular.

Las proteínas hnRNP (ribonucleoproteínas nuclear heterogéneas)  procesan el pre-mRNA mediante la  poliadenilación o previniendo la formación de previas estructuras secundarias en la cadena lineal de la misma Así, se dejan otras proteínas del RNA óptimas para la traducción.  En la microglia , estas proteínas  traducen el "factor activado del crecimiento transformante beta kinasa 1" (TAK1). Se activan los receptores TLR4, y a su vez, el factor de señalización nuclear KB . En el ictus cerebrovascular, esto produce una respuesta inflamatoria. La inflamación engloba la producción de interleukinas, interferon gamma y factor de necrosis tumoral alfa. Se genera citotoxicidad neuronal. 

Los hnRNP permiten la traducción de nuevas proteínas del pre-mRNA

Respuesta inflamatoria de las células de la microglia en el ictus cerebrovascular

                                                  Obtenido de: https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/31329361/